项目介绍
在生物科学研究方面,透射电镜可用来观察细胞整体结构、细胞亚细胞结构,包括(植物)细胞壁、细胞膜、细胞核和各种细胞器的变化、外源物质(如病原微生物、各种纳米颗粒)与细胞的关系,如外源物质进入细胞内部的方式、在细胞内的分布情况、细胞对外界刺激的反应(包括自噬、凋亡、坏死等)。
1、主要用于生物样品(细胞,生物组织)材料内部形貌的分析和研究;
2、对样品进行包埋,超薄切片,染色等工序,制成TEM样品;
3、通过透射电镜观察样品内部的组织形貌。
样品要求
1、对于细胞类,106以上的细胞,用新鲜的培养液兴奋细胞,用细胞刮刀刮下来或者酶消化,加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小时,1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于管底肉眼可见黄豆或者绿豆粒大小,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃新的固定液,然后放入4°C冰箱过夜。
2、对于组织类,新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³(长1-5mm×宽1mm×高1mm),离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中,然后放入4°C冰箱固定过夜。
3、对于细菌类,吸取OD0.5-0.8的培养物,加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小时,3000-5000转离心,5-10min,离心后弃上清,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,可以用预冷的pH7.2的PB洗1-2次,弃上清,沿管壁缓慢加入新的4℃预冷的固定液,然后放入4°C冰箱过夜。
4、EP管用封口膜封好(防止管口漏液),EP管外用泡沫包好,避免低温冰冻造成样品结冰。
5、样品中固体含量至少一颗芝麻粒大小,细胞和菌类要米粒大小;生物新鲜组织样品取材到相应浓度的戊二醛固定液里,不益超过1min,以便较少自融,戊二醛需要预冷4-10℃再使用;
6、一般送样方式为4℃冰袋冷藏运输,冷冻送样需要在订单中特别指明。
7、该项目不支持回收,请自行留样。
8、可测试细菌、细胞、生物组织等样品。
仪器参数
1、分辨率: 0.144nm (晶格像)@120kV
2、放大倍率:
(HC Zoom) ×200~×300,000 (31步)
(HR Zoom) ×2,000~×800,000 (26步)
(×2,000~×100,000 HR Zoom; SA)
(低倍模式) ×50~×1,000
3、相机长度:
(HC Diff) 0.2m ~ 8.0m
(HR Diff) 0.2m ~ 4.0m
4、束斑尺寸:
(HC Zoom) 0.4~1.5μmφ (5步)
Fine Probe(选配) 20~80nmφ(5步)
(HR Zoom) 0.3~1.0μmφ (5步)
Fine Probe(选配) 20~80nmφ(5步)
5、样品上的视野:
(HC Zoom) 倍率为×1,000时约110μmφ
(不使用物镜光阑、在荧光屏CCD上)
6、样品台:
最大倾斜角度 ±30°
(样品台移动 ±0.2mm, 标准样品杆)
样品测试效果图



1、动物普通组织如何取材、送样?
取材原则:切薄并尽快投入固定液;注意下述要求。
1)请尽快固定。动物组织最好在离体后1 min内开始固定。
2)非灌注的组织,厚度不超过4 mm,请用恰当方式(比如切宽薄片)体现位置和层次关系。尽量不要事先切成很小的颗粒。
3)请用锋利薄刀片切组织,朝一个方向划,不要来回切割,不要挤压、拉扯。
4)含有食物残渣(如消化道)、大量血液(如心肌)或其它黏附物(如乳腺等)的组织,请用生理盐水快速漂洗,再投入固定液。
5)请保证固定液量充足。固定液和组织的体积比不小于20 : 1。
6)最初的30 min以后,最好在4 ℃的固定液中浸泡,严禁结冰(太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使组织结冰。冬季宁可常温送样)。
备注:
(1)组织尺寸和容器关系(只装一个的参考标准):
芝麻到绿豆大小(如小鼠肾上腺):请用1.5 ml EP管;
黄豆大小(小鼠肾脏):请用5 ml离心管;
铺展面积类似蚕豆大小的组织片:请用平底的25 ml广口瓶;
(2)每个容器含有N个组织时:容器体积要适当增大,组织不要相互挤压变形。
2、培养细胞常规简易取材、送样?
1)最好刮取细胞,收集在离心管中,1500 rpm离心5 ~ 10 min(该参数可按自己的经验调整,目的是不损伤细胞结构的情况下去掉培养液成分)。
2)弃上清,加入固定液重悬细胞。
3)细胞悬液尽快(1分钟内,久了离心难以紧固)转移至1.5 ml尖底EP管,立即以10000 r/min离心12 min(该参数适用于一般小型台式离心机,不可随意更改,务必使细胞离紧不散);离紧后的细胞约半颗绿豆大小,切不可太大。
4)静置15 min,然后小心弃上清,再沿管壁缓慢加入室温或4 ℃固定液(不可冲击、吹散细胞)。
5)在4 ℃保存或运输。严禁结冰(太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使组织结冰。冬季宁可常温送样)。
备注:
1)对细胞表面结构没有特殊观察要求的动物细胞,均可按本法操作,比如精子、血液、脱落细胞等。薄壁细菌也可按本法处理。
2)观察细胞连接的实验,严禁用消化的方法收集细胞。
3)不耐受高速离心的样品,请以悬液送样。尽可能装满,以减少运输途中的震荡。
4)厚壁真菌等离心紧固后不易渗透的样品,也请以悬液送样,要求同上。
3、固定液类型及介绍?
大多数动物组织和培养细胞,提供2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液。专门观察神经髓鞘的,提供3%戊二醛+Plus辅剂(临用前5 min内混合);观察厚壁真菌或细菌芽孢等,提供K-T固定液。具体根据样本类型选择合适的固定液,并非完全统一。